Содержание
- 2. Общий метод получения рекомбинантного белка Молекулярное клонирование гена или его фрагмента Трансформация клеток, отбор клонов Выращивание
- 3. Молекулярное клонирование
- 4. Электропорация 25 мкФ = 2500 В при 200 Ω за 5 мс
- 5. Отбор клонов protein
- 6. Использование рекомбинантных белков Научные исследования – внесение мутаций, гомогенные ферменты, структурные исследования, слитые белки, антигены и
- 9. Рекомбинантные белки для лечения заболеваний: особые требования Высокая степень очистки Точная копия природного белка или научные
- 10. Используемые системы экспресии Бактерии Esherichia coli и Bacillus subtilis Дрожжи Saccharomyces cerevisae и Pichia pastoris Линии
- 11. Экспрессионный вектор Точка инициации репликации - ORI Селекционные маркеры Промотор целевого гена Терминатор транскрипции Полилинкер -
- 12. Бактерия Esherichia coli Быстрый рост (6-12 часов от посева до окончания индукции) Относительно высокий выход целевого
- 13. E.coli – пример системы экспресии Внехромосомная репликация вектора Индуцибельный промотор Специальный штамм Дополнительный остаток Met[-1] или
- 14. E.сoli – варианты систем экспрессии
- 15. E.coli – примеры использования Белки Bactericidal/permeability-increasing Protein, rDNA Carboxypeptidase, rDNA G-CSF, rDNA/Amgen GM-CSF, rDNA/Schering-Plough Hyaluronidase, rDNA
- 16. Дрожжи Pichia pastoris Относительно быстрый рост (3-5 дней от посева до окончания индукции) Высокий выход целевого
- 17. P.pastoris – получение продуцента
- 18. P.pastoris – схема ферментации
- 19. P.pastoris – примеры использования Alfimeprase - Accfib; 3-203-fibrolase (3-serine) (Agkistrodon contortrix recombinant) DX-88; ecallantide; kallikrein inhibitor
- 20. Линия клеток CHO Пригодна для белков любого размера Любые пост-трансляционные модификации Не содержит трансмиссивных вирусов Существует
- 21. CHO – вариант системы экспресии Внехромосомная репликация вектора Индуцибельный промотор Специальный штамм Дополнительный остаток Met[-1] или
- 22. Methotrexate (MTX) Selection Gene of interest DHFR Transfect dfhr- cells Grow in Nucleoside Free medium Culture
- 23. Methotrexate (MTX) Selection Grow in 5.0 uM Mtx Grow in 0.25 uM Mtx Culture a Colony
- 24. CHO – примеры использования Гормоны и цитокины Bone Morphogenic Protein-2, rDNA Bone Morphogenic Protein-7, rDNA EPO,
- 26. Скачать презентацию