Содержание
- 2. Основные протеомные подходы Протеомика «сверху-вниз» или «top-down», протеомика «снизу-вверх» или «bottom-up», «shot-gun» протеомика
- 3. Белки и пептиды Моноизотопные массы аминокислотных остатков ADLKQLMDNEVLMAFTSYATIILAKMMFLSSATAFQRLTNKVFANPEDCAGFGKGENAKKFLRTDEKVERVRRAHLNDLENIVPFLGIGLLYSLSGPDLSTALIHFRIFVGARIYHTIAYLTPLPQPNRGLAFFVGYGVTLSMAYRLLRSRLYL (Глутатион-трансфераза человека) пептидная связь аминокислотный остаток
- 4. SAPASTTQPIGSTTSTTTKTAGATPATASGLFTIPDGDFFSTARAIVASNAVATNEDLSKIEAIWKDMKVPTDTMAQAAWDLVRHCADVGSSAQTEMIDTGPYSNGISRARLAAAIKEVCTLRQFCMKYAPVVWNWMLTNNSPPANWQAQGFKPEHKFAAFDFFNGVTNPAAIMPKEGLIRPPSEAEMNAAQTAAFVKITKARAQSNDFASLDAAVTRGRITGTTTAEAVVTLPPP (Белок оболочки Х-вируса картофеля) Пептидный фингерпринт Num From-To MH+ HPLC pI Sequence 1 1- 19
- 5. История масс-спектрометрии 1912 год — Томсон создает первый масс-спектрограф и получает масс-спектры молекул кислорода, азота, угарного
- 6. Масс-спектрометр Томсона
- 7. ICP масс-спектрометр (ICP-MS) Серия 7700x
- 8. Электроспрей-TOF (ESI-TOF) масс-спектрометр Серия 6500
- 9. Квадрупольный масс-спектрометр (QMS) 10 000 u/sec | серия 6100
- 10. Тройной квадруполь (QMS) Серия 7000
- 11. Ионная ловушка (ITMS) Серия 6300
- 12. MALDI-TOF: Bruker Reflex III
- 13. Прибор для капиллярного электрофореза с масс-спектрометрическим детектором (CE/MS)
- 14. Общий вопрос - что измеряется? Масс- спектрометрия – расчет молекулярной массы ионов по их поведению в
- 15. Источник ионов Система разделения ионов Детектор Общая схема масс-спектрометра MALDI ESI Времяпролетные (TOF) Квадрупольные (Q) Ионные
- 16. ! Масс-спектрометр – вакуумный прибор
- 17. Способы ионизации Газовая фаза электронная ионизация (EI) химическая ионизация (CI) электронный захват (EC) ионизация в электрическом
- 18. Источники ионизации ESI MALDI APCI
- 19. Масс-анализаторы Непрерывные масс-анализаторы Магнитный и электростатический секторный масс-анализатор (англ. Sector instrument) Квадрупольный масс-анализатор (англ. Quadrupole mass
- 20. Детекторы фотопластина динодные вторично-электронные умножители фотоумножители микроканальные пластины коллекторы Фарадея
- 21. ESI – электрораспыление и ионизация Растворители: вода, ацетонитрил, метанол Анализируемое вещество подается в растворе через капилляр
- 22. МАТРИЦА: * Поглощает энегрию лазерного излучения, “вскипая”, увлекает в газовую фазу молекулы анализируемого вещества * Способствует
- 23. Пластина для MALDI
- 24. MLLTQVQTYVLSIIPSGPLKAEIAQRLEDVFAGKNTDLEVLMEWLKTRPILSPLTKGILGFVFTLTVPSERGLQRRRFVQNALNGNGDPNNMDKAVKLYRKLKREITFHGAKEISLSYSAGALASCMGLIYNRMGAVTTEVAFGLVCATCEQIADSQHRSHRQMVTTTNPLIRHENRMVLASTTAKAMEQMAGSSEQAAEAMEVASQARQMVQAMRTIGTHPSSSAGLKNDLLENLQAYQKRMGVQMQRFK Пример MALDI масс-спектра: триптический гидролизат фрагмента белка М1 вируса гриппа
- 25. Точный механизм MALDI ионизации неизвестен, однако в результате образуются, как правило, однозарядные ионы, захватившие протон либо
- 26. Пептид массой 2000 Д содержит ~ 100 атомов углерода в нем с вероятностью ~ 30% не
- 27. * Оба метода ионизации требуют высокой химической чистоты анализируемого вещества. * Диапазон концентрации аналита при ESI
- 28. Квадрупольный анализатор Ионная ловушка Магнитный анализатор Времяпролетный масс-анализатор СИСТЕМЫ РАЗДЕЛЕНИЯ ИОНОВ
- 29. Микроканальные пластины При MALDI существует разброс по энергиям, приводящий к уширению пиков. Энергия ускорения 20 кэВ
- 30. Использование отражающего напряжения (рефлектрона Мамырина) Использование «отсрочки экстракции» вакуум Уменьшение стартового разброса ионов – повышение разрешения
- 31. Рефлектрон
- 32. Разрешение до 30 000, точность до 0.002% (=20ppm). Разрешение и точность MALDI-TOF-MS
- 33. Когда ион, захвативший избыток энергии в процессе MALDI, распадается в области свободного дрейфа, фрагменты имеют ту
- 34. для адекватного отражения дочерних ионов: U1ref/U0ref = m1/m0 набор масс-спектров с разным U рефлектрона компьютерно “сшиваются”
- 35. На верхний и нижний электроды подано постоянное положительное напряжение. На короткое время отталкивающее напряжение с верхнего
- 36. Сочетает хорошее разрешение времяпролетного масс-спектрометра с возможностью хорошего выделения (включением квадруполя) определенных ионов для получения спектров
- 37. Ионы «запираются» в мощный (7-14 тесла) секторный сверхпроводящий магнит, где вращаются под действием силы Лоренца с
- 38. Сравнение характеристик приборов
- 39. Интерпретация ESI-масс-спектров (что можно узнать из ESI-масс-спектра?)
- 40. Масс-спектр миоглобина
- 41. ESI-масс-спектры Определение молекулярной массы белка Исследование вторичной структуры (распределение зарядов и водородный обмен) Как определить молекулярную
- 42. Автоматическая деконволюция ESI-спектров
- 44. Скачать презентацию