Оптическая микроскопия. Лазерная сканирующая конфокальная микроскопия презентация

Принцип лазерной сканирующей
конфокальной микроскопии
Принцип лазерной сканирующей
конфокальной микроскопии

Принцип лазерной сканирующей
конфокальной микроскопии
Принцип лазерной сканирующей
конфокальной микроскопии
Ito & Aoki // Adv. Polym. Sci. 2005, 182, 131
Феофанов // Успехи биолог. хим. 2007, 47, 371
Конфокальная диафрагма для пространственной селекции сигнала флуоресцентного отклика, сканирование, информация о трехмерной структуре

Фазовое разделение в смесях ПС / ПММА:
результаты ЛCКМ
Фазовое разделение в смесях ПС / ПММА:
результаты ЛCКМ
Kumacheva et al. // Langmuir 1997 , 13 (9), 2483-2489

ЛСКФМ: динамика фазового разделения
в смесях полимеров
ЛСКФМ: динамика фазового разделения
в смесях полимеров
Ito & Aoki // Adv. Polym. Sci. 2005, 182, 131-169

Агрегация молекул β-глюкана в растворе:
наблюдения ЛCКМ
Агрегация молекул β-глюкана в растворе:
наблюдения ЛCКМ
Wu et al. // J. Agric. Food Chem. 2006, 54(3), 925-934
Возрастание концентрации в ряду: (A) 5, (B) 10, (C) 15, (D) 40, (E) 60, (F) 80, и (G) 100 мг/мл. Размер кадра 300 мкм × 300 мкм

Гепатоциты печени (3D)
Гепатоциты печени (3D)
Разрешение: dx,y ≈ 0.4 λ / NA, dz ≈ 1.4 λn / NA2
10 мкм

Оптическая микроскопия
Оптическая микроскопия
Лазерная сканирующая конфокальная микроскопия
многофотонная схема

Преимущества многофотонной схемы ЛСКМ
Преимущества многофотонной схемы ЛСКМ
Denk & Svoboda // Neuron 1997, 18, 351-357
Сочетание высокого разрешения и высокой интенсивности сигнала (нет необходимости в диафрагме), предотвращение обесцвечивания красителя (возбуждение на иной длине волны), меньше рассеяние (больше контраст)

Изображение многофотонной ЛСКФМ
Изображение многофотонной ЛСКФМ
Denk & Svoboda // Neuron 1997, 18, 351-357
Изображение нейрона in vivo, высокое разрешение

Оптическая микроскопия
Оптическая микроскопия
4π-микроскопия

Принципы 4π-микроскопии
Принципы 4π-микроскопии
Bewersdorf et al. // G.I.T. Imaging & Microscopy 2004, (4), 24-25

Разрешение 4π-микроскопии
Разрешение 4π-микроскопии
Egner & Hell // TRENDS Cell Biol 2005, 15(4), 207-215

Оптическая микроскопия
Оптическая микроскопия
STED микроскопия
STED: stimulated emission depletion
(Истощение индуцированного излучения)

Принципы STED-микроскопии
Принципы STED-микроскопии
Ito & Aoki // Adv. Polym. Sci. 2005, 182, 131-169

Принципы STED-микроскопии
Принципы STED-микроскопии
Hell // Nature Biotechnol. 2003, 21(11), 1347-1355

STED-микроскопия преодолела
оптический предел разрешения
STED-микроскопия преодолела
оптический предел разрешения
Ito & Aoki // Adv. Polym. Sci. 2005, 182, 131-169
Молекулы флуоресцентного красителя

Разрешение STED-микроскопии
Разрешение STED-микроскопии
Garini, et al. // Curr. Opin. Biotechnol. 2005, 16, 3-12

Электронная микроскопия
Электронная микроскопия
Сканирующая электронная микроскопия
сер. 40х XX в, В.К. Зворыкин
1931 Р. Руденберг получил патент на просвечивающий электронный микроскоп
1932 году М. Кнолль и Э. Руска построили первый прототип современного прибора (1986 год - Нобелевская премия по физике)
разработки кон. 40х–50е гг. XX в, Ч. Отли, университет Кембриджа
1965 г., первый коммерческий СЭМ, Stereoscan Mark 1, Cambridge Instruments

Принцип СЭМ
Принцип СЭМ

Отклик на первичный пучок
Отклик на первичный пучок

Взаимодействие первичных
электронов с образцом
Взаимодействие первичных
электронов с образцом
моделирование
Монте-Карло →

Схема СЭМ
Схема СЭМ
PE – первичные электроны,
OL – линзы объектива,
SE – вторичные электроны,
BED – детектор обратно-рассеянных электронов,
EDX/WDX – рентгеновские детекторы

Детектор Эверхарта-Торнли
Детектор Эверхарта-Торнли