Генная инженерия бактерий презентация

Маркерные последовательности
Ориджин репликации
Полилинкер

Классификация плазмид
Коньюгативные плазмиды
R-факторы
Col-факторы
Плазмиды биодеградации

В клетках они могут существовать в 3 формах:
ССС
Форма релаксированного кольца
Линейная форма плазмиды

Общая стратегия молекулярного клонирования
Создание рекомбинатной ДНК
Трансфекция

Выделение пДНК
1) рост бактерий и амплификация пДНК
2)лизис клеток
3)очистка плазмидной ДНК

Рост бактерий

Лизис культуры
Физические:
-Баллистические методы
-Экструзия
-Чередование заморозки и разморозки
-Ультразвук
-Температурные шоки
Химические:
-Детергентный лизис клеток
Энзиматические
Биологические:
-Апоптоз

ЭДТА разрыхляет наружную мембрану, ингибирует нуклеазы
Лизоцим – разрушает клеточную стенку.
SDS разрушает цитоплазматическую мембрану, денатурирует белки, ингибирует нуклеазы.

Очистка плазмидной ДНК
Отличие геномной и плазмидной ДНК:
- Масса и размер
- Плазмидная ДНК экстрагируется в виде ковалентно замкнутых кольцевых молекул

Трансдукция
Капсид фага вмещает до 50 кб
Может вместить до 20 кб
Эффективность внедрения 100%
Имеет сильные промоторы

Космиды
Плазмиды с cos сайтами фага лямда
-Способны вместить до 40 кб чужеродной ДНК
-Так как в их геном можно вмещать больше генетической информации, то для создания геномной библиотеки потребуется меньше времени

Фазмиды
Искусственные гибридные векторы на основе фага и плазмиды

Искусственные бактериальные хромосомы
Способны вместить до 300 кб чужеродной ДНК
Созданы на основе F плазмид