Слайд 2
![Иммуноферментные электроды К кислород-проницаемой тефлоновой пленке кислородного электрода Кларка плотно](/_ipx/f_webp&q_80&fit_contain&s_1440x1080/imagesDir/jpg/212621/slide-1.jpg)
Иммуноферментные электроды
К кислород-проницаемой тефлоновой пленке кислородного электрода Кларка плотно
прилегает мембрана не
с иммобилизованным ферментом, а с иммобилизованными антителами к анализируемому антигену.
Слайд 3
![В раствор, содержащий анализируемый антиген, добавляют определенное количество антигенов, предварительно](/_ipx/f_webp&q_80&fit_contain&s_1440x1080/imagesDir/jpg/212621/slide-2.jpg)
В раствор, содержащий анализируемый антиген, добавляют определенное количество антигенов, предварительно меченных
каталазой.
↓
Иммуноферментный электрод погружают в исследуемый раствор и выдерживают при нужной температуре в течение необходимого времени.
↓
Меченые и немеченые антигены, конкурируя между собой, связываются с антителами на поверхности электрода.
Слайд 4
![Удаляют свободные антигены, путем промывки иммуноферментного электрода ↓ Добавляют в](/_ipx/f_webp&q_80&fit_contain&s_1440x1080/imagesDir/jpg/212621/slide-3.jpg)
Удаляют свободные антигены, путем промывки иммуноферментного электрода
↓
Добавляют в исследуемый раствор пероксид
водорода
↓
По сигналу электрода определяют скорость образования кислорода в результате катализируемой каталазой реакции :
H2O2 → H2O + 1/2O2
↓
Строят кривую зависимости сигнала от числа немеченых антигенов.
Слайд 5
![Аналитические проточные реакторы с иммобилизованными ферментами Для анализа метаболитов и](/_ipx/f_webp&q_80&fit_contain&s_1440x1080/imagesDir/jpg/212621/slide-4.jpg)
Аналитические проточные реакторы
с иммобилизованными ферментами
Для анализа метаболитов и ферментов в клинической
и лабораторной практике достаточно широко используются аналитические проточные реакторы с иммобилизованными ферментами.
Пример: определение триптофана
В колонке иммобилизованы E: триптофаназа и лактатдегидрогеназа
триптофан + пиридоксальфосфат →
индол + NH3 +ПВК;
ПВК+ НАДН2 → молочная кислота + НАД.
Детекция убыли НАДН на 360 нм
Слайд 6
![Ферментные микрокалориметрические датчики Две идентичные колонки ,заполненных носителем с иммобилизованным](/_ipx/f_webp&q_80&fit_contain&s_1440x1080/imagesDir/jpg/212621/slide-5.jpg)
Ферментные микрокалориметрические датчики
Две идентичные колонки ,заполненных носителем с иммобилизованным на нем
E.
В нижней части каждой из колонок имеется термистор.
При пропускании через колонки простого буфера разность t◦ между термисторами будет равна нулю.
При введении в одну из колонок S в результате ферментативной реакции произойдет тепловыделение.
Разность t◦ между измерительной колонкой и колонкой сравнения будет пропорциональна количеству превращенного S.
Слайд 7
![Основные направления использования ферментов в медицине: Энзимопатология 2) Энзимодиагностика 3) Энзимотерапия](/_ipx/f_webp&q_80&fit_contain&s_1440x1080/imagesDir/jpg/212621/slide-6.jpg)
Основные направления использования ферментов в медицине:
Энзимопатология
2) Энзимодиагностика
3) Энзимотерапия
Слайд 8
![Использование: 1. Заместительная терапия (ряда наследственных заболеваний и функциональной недостаточности](/_ipx/f_webp&q_80&fit_contain&s_1440x1080/imagesDir/jpg/212621/slide-7.jpg)
Использование:
1. Заместительная терапия (ряда наследственных заболеваний и функциональной недостаточности пищеварительных желез).
2.
Тромболитическая терапия (парентеральное применение свободных и связанных форм ферментов для лизиса тромбов в кровеносных со-
судах).
3. Терапия воспалительных процессов.
4. Лечение онкологических заболеваний.
5. Терапия вирусных заболеваний.
Слайд 9
![6. В качестве локальных литических средств (для расщепления и удаления](/_ipx/f_webp&q_80&fit_contain&s_1440x1080/imagesDir/jpg/212621/slide-8.jpg)
6. В качестве локальных литических средств (для расщепления и удаления из
организма некротических масс и экссудатов).
7. Для улучшения биодоступности лекарственных препаратов (ускорения процессов их проникновения).
8. Специфическая модуляция активности ферментов, участвующих в патогенезе заболеваний, а также обеспечивающих детоксикацию ксенобиотиков.
Слайд 10
![Заместительная терапия При недостаточности поджелудочной железы применяют смесь различных ферментов](/_ipx/f_webp&q_80&fit_contain&s_1440x1080/imagesDir/jpg/212621/slide-9.jpg)
Заместительная терапия
При недостаточности поджелудочной железы применяют смесь различных ферментов –
пепсина,
трипсина, химотрипсина, липазы и α-амилазы.
(надо кратко знать, как они действуют=)
Слайд 11
![2. Тромболитическая терапия Стрептокиназа –активирует плазминогена (естественный предшественник протеиназы плазмина,](/_ipx/f_webp&q_80&fit_contain&s_1440x1080/imagesDir/jpg/212621/slide-10.jpg)
2. Тромболитическая терапия
Стрептокиназа –активирует плазминогена (естественный предшественник протеиназы плазмина, предотвращающей образование
тромба в кровеносной системе).
Многие осложнения, связанные с применением стрептокиназы, были сняты благодаря внедрению иммобилизованной стрептокиназы,т.к. она:
1)Более стабильна
2)Не искажает общую формулу крови,
3) Нетоксична
4) Более безопасная с точки зрения иммуногенности.
Слайд 12
![2. Тромболитическая терапия Урокиназа - превращает плазминоген в плазмин. Фибринолизин-](/_ipx/f_webp&q_80&fit_contain&s_1440x1080/imagesDir/jpg/212621/slide-11.jpg)
2. Тромболитическая терапия
Урокиназа - превращает плазминоген в плазмин.
Фибринолизин- гидролизует фибрин (основной
белка, образующегося при свертывании крови).
Слайд 13
![3. Терапия воспалительных процессов В отличие от живых клеток, мертвые](/_ipx/f_webp&q_80&fit_contain&s_1440x1080/imagesDir/jpg/212621/slide-12.jpg)
3. Терапия воспалительных процессов
В отличие от живых клеток, мертвые клетки
обычно
не способны защищать себя от привнесенных извне протеаз.
Протеазы гидролизуют денатурированные белки в омертвевших тканях и не затрагивают нативные внутриклеточные белки из-за компактной третичной структуры.
При внутримышечном введении протеолитические ферменты оказывают противовоспалительное действие.
Слайд 14
![4. Лечение онкологических заболеваний Аспарагиназа : L-аспарагин + Н2О →](/_ipx/f_webp&q_80&fit_contain&s_1440x1080/imagesDir/jpg/212621/slide-13.jpg)
4. Лечение онкологических заболеваний
Аспарагиназа :
L-аспарагин + Н2О → L-аспартат + NH3
Для
некоторых опухолей и лейкемических клеток аспарагин -незаменимая аминокислота.
Аспарагиназа, введенная в область опухолевых клеток, разрушает аспарагин и вызывает этим торможение их роста и последующую гибель.
На нормальные клетки аспарагиназа существенного влияния не оказывает, так как они способны синтезировать аспарагин.
Слайд 15
![5. Терапия вирусных заболеваний Вирусные НК в период интенсивной репликации,](/_ipx/f_webp&q_80&fit_contain&s_1440x1080/imagesDir/jpg/212621/slide-14.jpg)
5. Терапия вирусных заболеваний
Вирусные НК в период интенсивной репликации, транскрипции и
трансляции по сравнению с нуклеопротеидными комплексами инфицированной клетки в меньшей степени защищены от действия нуклеаз.
Нуклеазы из поджелудочной железы крупного рогатого скота используют для лечения вирусных заболеваний.
Пример: Для лечения клещевого энцефалита применяют панкреатическую РНКазу. Панкреатическая ДНКаза - при герпесных и аденовирусных инфекциях.
Слайд 16
![6. В качестве локальных литических средств Протеолитические Е расщепляют некротизированную](/_ipx/f_webp&q_80&fit_contain&s_1440x1080/imagesDir/jpg/212621/slide-15.jpg)
6. В качестве локальных литических средств
Протеолитические Е расщепляют некротизированную ткань и
фибринозные образования, разжижают вязкие секреты, экссудаты (жидкость, накапливающаяся при воспалениях в тканях и полостях тела).
Трипсин (из поджелудочной железы крупного рогатого скота) облегчает удаление вязких секретов и экссудатов при воспалительных заболеваниях дыхательных путей (трахеитах, бронхитах, пневмонии и т. д.
Применяется в виде аэрозоля для ингаляции или в иммобилизованном виде. Носители (волокнистые материалы на основе целлюлозы, поливинилового спирта, солей альгиновой кислоты).
Слайд 17
![7. Для улучшения биодоступности лекарственных препаратов Гиалуронидаза (получают из семенников](/_ipx/f_webp&q_80&fit_contain&s_1440x1080/imagesDir/jpg/212621/slide-16.jpg)
7. Для улучшения биодоступности лекарственных препаратов
Гиалуронидаза (получают из семенников крупного рогатого
скота):
гиалуроновая кислота →глюкозамин + глюкуроновая кислота
Увеличивается проницаемость тканей, т.к. гиалуроновая кислота является своеобразным цементирующим веществом соединительной ткани
Применяют для ускорения всасывания различных лекарственных веществ, вводимых под
кожу и внутримышечно.
Слайд 18
![Недостатки применения ферментов: высокая иммуногенность 2) невысокая стабильность 3) низкий терапевтический индекс 4) кратковременность действия](/_ipx/f_webp&q_80&fit_contain&s_1440x1080/imagesDir/jpg/212621/slide-17.jpg)
Недостатки применения ферментов:
высокая иммуногенность
2) невысокая стабильность
3) низкий терапевтический индекс
4)
кратковременность действия
Слайд 19
![Недостатки можно устранить с помощью специфической модификации ферментов: нековалентная модификация](/_ipx/f_webp&q_80&fit_contain&s_1440x1080/imagesDir/jpg/212621/slide-18.jpg)
Недостатки можно устранить с помощью специфической модификации ферментов:
нековалентная модификация
низкомолекулярные соли,
ионы которых влияют на растворимость, стабильность и специфическую активность E. Са2+стабилизируют и активируют α-амилазу.
Полиэлектролиты. Активность панкреатической РНКазы по отношению к вирусу стоматита в комплексе с сульфированными декстранами возрастала на несколько порядков.
Слайд 20
![Недостатки можно устранить с помощью специфической модификации ферментов: 2. Ковалентная](/_ipx/f_webp&q_80&fit_contain&s_1440x1080/imagesDir/jpg/212621/slide-19.jpg)
Недостатки можно устранить с помощью специфической модификации ферментов:
2. Ковалентная модификация с
полисахаридами или полиэтиленгликолем часто приводит к снижению иммуногенности препарата, из-за снижения количества антигенных детерминант модифицированного белка.
3. Вторичная модификация
Террилитин (протеолитический фермент), связанный через полимерную цепочку с антителами к фибрину, более специфичен при лизисе тромбов.
Слайд 21
![8. Специфическая модуляция активности ферментов, детоксикация ксенобиотиков. Первая стадия биотрансформации](/_ipx/f_webp&q_80&fit_contain&s_1440x1080/imagesDir/jpg/212621/slide-20.jpg)
8. Специфическая модуляция активности ферментов, детоксикация ксенобиотиков.
Первая стадия биотрансформации ксенобиотиков микросомальная
монооксигеназная система (может приводить к образованию как более, так и
менее токсичных по сравнению с исходным соединением метаболитов).
Вторая стадия обеспечивается ферментативными системами, ведущими
различного рода реакции конъюгации и в большинстве случаев заканчивается полным обезвреживанием ксенобиотика и его реакционноспособных метаболитов.
Слайд 22
![Первая стадия Цитохромы Р-450](/_ipx/f_webp&q_80&fit_contain&s_1440x1080/imagesDir/jpg/212621/slide-21.jpg)
Первая стадия
Цитохромы Р-450
Слайд 23
![Индукция цитохромов Р-450 флавоноидами Механизмы: прямая стимуляция генной экспрессии через](/_ipx/f_webp&q_80&fit_contain&s_1440x1080/imagesDir/jpg/212621/slide-22.jpg)
Индукция цитохромов Р-450 флавоноидами
Механизмы:
прямая стимуляция генной экспрессии через специфический рецептор (в
результате связывания с лиганд активируемым транскрипционным фактором – рецептором арилзамещенных углеводородов (AhR – aryl hydrocarbon receptor).
стабилизация мРНК
Слайд 24
![Индукция цитохромов Р-450 флавоноидами При низких концентрациях флавоноиды выступают как](/_ipx/f_webp&q_80&fit_contain&s_1440x1080/imagesDir/jpg/212621/slide-23.jpg)
Индукция цитохромов Р-450 флавоноидами
При низких концентрациях флавоноиды выступают как AhR антагонисты,
связывающиеся с рецептором без активации транскрипционного фактора.
При высоких концентрациях те же самые флавоноиды функционируют как AhR агонисты
Слайд 25
![Индукция цитохромов Р-450 флавоноидами Минусы: -Часто продукты микросомального окисления ксенобиотика](/_ipx/f_webp&q_80&fit_contain&s_1440x1080/imagesDir/jpg/212621/slide-24.jpg)
Индукция цитохромов Р-450 флавоноидами
Минусы:
-Часто продукты микросомального окисления ксенобиотика представляют большую опасность
для клетки по сравнению с исходным соединением.
-ускорение процессов микросомального окисления ксенобиотика сопровождается усилением генерации АФК (активных форм кислорода) и последующей инициацией процессов ПОЛ.
Часто используют соединения подавляющие активность микросомальных монооксигеназ.
Слайд 26
![Ингибирование цитохромов Р-450 флавоноидами Ингибирование генной экспрессии семейства CYP1 посредством](/_ipx/f_webp&q_80&fit_contain&s_1440x1080/imagesDir/jpg/212621/slide-25.jpg)
Ингибирование цитохромов Р-450 флавоноидами
Ингибирование генной экспрессии семейства CYP1 посредством блокирования AhR
рецептора в ряде случаев определяет антиканцерогенную активность отдельных флавоноидов (пр. кверцетин).
Связывания флавоноида с NADPH – цитохром Р-450 редуктазой или с цитохромом Р-450;
Конкуренции с другими субстратами
Модификации мест их связывания
Изменение липидного микроокружени, вследствие чего затрудняется перенос электронов к цитохрому.
Слайд 27
![Эффекторное действие флавоноидов во многом определяется: особенностями структуры их пропанового](/_ipx/f_webp&q_80&fit_contain&s_1440x1080/imagesDir/jpg/212621/slide-26.jpg)
Эффекторное действие флавоноидов во многом определяется:
особенностями структуры их пропанового фрагмента,
наличием различных
радикалов в ароматической части молекулы,
степенью гликозилирования,
местом присоединения углеводных остатков и их природой,
конфигурацией гликозидных связей
характером сочленения гликозидной части с агликоном (О-гликозиды, С-гликозиды).
Слайд 28
![Примеры флавоноидов Флавон Эпикатехин Кверцетин](/_ipx/f_webp&q_80&fit_contain&s_1440x1080/imagesDir/jpg/212621/slide-27.jpg)
Примеры флавоноидов
Флавон Эпикатехин
Кверцетин
Слайд 29
![Лучше действовать на вторую стадию биотрансформации ксенобиотиков. Действие на глутатион](/_ipx/f_webp&q_80&fit_contain&s_1440x1080/imagesDir/jpg/212621/slide-28.jpg)
Лучше действовать на вторую стадию биотрансформации ксенобиотиков.
Действие на глутатион S-трансферазы(ГТ),которые
конъюгируют ксенобиотики
и их реакционноспособные метаболиты с глутатионом,
восстанавливают органические гидропероксиды,
участвуют в метаболизме конечных цитотоксичных продуктов ПОЛ
обеспечивают связывание и внутриклеточный транспорт ряда эндогенных лигандов (билирубина, желчных кислот, жирных кислот, производных гема, нейромедиаторов и стероидных гормонов).
Слайд 30
![](/_ipx/f_webp&q_80&fit_contain&s_1440x1080/imagesDir/jpg/212621/slide-29.jpg)
Слайд 31
![Глутатион S-трансфераза 3 класса: альфа, мю и пи. У млекопитающих](/_ipx/f_webp&q_80&fit_contain&s_1440x1080/imagesDir/jpg/212621/slide-30.jpg)
Глутатион S-трансфераза
3 класса: альфа, мю и пи.
У млекопитающих ГТ присутствуют
практически во всех типах клеток.
Изоферментный состав ГТ варьирует в зависимости от их локализации, что определяет разную устойчивость органов и тканей к окислительному стрессу,к действию ксенобиотиков и эндотоксинов.
Слайд 32
![В растительной пище много химических соединений, выступающих в качестве индукторов](/_ipx/f_webp&q_80&fit_contain&s_1440x1080/imagesDir/jpg/212621/slide-31.jpg)
В растительной пище много химических соединений, выступающих в качестве индукторов ГТ,
что приводит к снижению частоты раковых заболеваний.
Флаваноны и флавоны увеличивают не только
активность ГТ, но и активность других ферментов второй стадии биотрансформации ксенобиотиков (УДФ-глюкуронозилтрансфераз).
При различных хронических и острых заболеваниях печени, сопровождающихся эндогенной интоксикацией организма, нормальное функционирование ГТ может нарушаться.
Слайд 33
![Для профилактики цитотоксического действия ксенобиотиков при заболеваниях, сопровождающихся эндогенной интоксикацией](/_ipx/f_webp&q_80&fit_contain&s_1440x1080/imagesDir/jpg/212621/slide-32.jpg)
Для профилактики цитотоксического действия ксенобиотиков при заболеваниях, сопровождающихся эндогенной интоксикацией организма
используют эффекторные свойства флавоноидов.
Введение экспериментальным животным растительных экстрактов из семян расторопши, лофанта, душицы и горца с повышенным содержанием флавоноидов
↓
снижает тяжесть патобиохимических проявлений холестаза, благодаря способности флавоноидов индуцировать ГТ печени.