Содержание
- 2. Проточная цитометрия – исследователь- ская технология, позволяющая на основе измерений оптических параметров, охаракте- ризовать физические и
- 3. Принцип проточной цитометрии (подсчет клеток крови) был запатентован в 1953 году в США Уоллесом Коултером (Wallace
- 4. Разделение (сортировка) исходной суспензии клеток на три фракции по их электрическому заряду: электростатическое отклонение Суспензия изучаемых
- 5. В 1969 году был выпущен первый серийный проточный цитометр в форме приставки к флуоресцентному микроскопу фирмы
- 6. Термин «проточная цитометрия» («flow cyto- metry») был предложен на международной конференции «The Conference of the American
- 7. Проточная цитометрия позволяет охаракте- ризовать физические и биохимические свой- ства суспензии клеток в диапазоне их разме-
- 8. В ходе анализа возможно определять 5-10 различ-ных параметров клетки: размер, содержание ДНК, белков (цитокинов, транскрипционных факоров)
- 9. Проточная цитометрия в её современных вариан- тах - мультипараметрический анализ. Это позволяет минимизировать необходимый объем биологического
- 10. Луч лазера одновременно: 1. Рассеивается клетками: малоугловое (пря-мое) светорассеивание (угол ок. 10о, если Ø клетки ≈
- 11. side scatter forward scatter лазер Клетка, пересекающая лазерный луч ФЛУОРЕСЦЕНЦИЯ светорассеивание Измерение интенсивности флуоресценции Измерение интенсивности
- 12. Принципиальное устройство проточного цитометра (flow cytometer) Лазер Устройство для создания ламинарного потока клеток изучаемой суспензии (гидро-
- 13. 1. Устройство для формирования ламинарного потока изучаемых клеток: гидродинамическая фокусировка – струя в струе Изотоничный и
- 14. Суспензия изучаемых клеток Изотоничный и забуференный солевой раствор Кварцевая проточная кювета (в форме капилляра): скорость по-
- 15. 2. Оптическая система для регистрации интен- сивности рассеянного светового потока Измерение интенсивности рассеянного клетками светового потока
- 16. Лазерное излучение Боковое светорассеивание(угол около 90о) Прямо светорассеивание (угол около 10о) Прямое и боковое светорассеивание лазерного
- 17. Представление распределения клеток изучаемой суспензии по их размерам (гистограмма распределения) Количество клеток Размер клеток, μm
- 18. Повышение чувствительности цитометрического анализа суспензии клеток крови, обозначением порога чувствительности 1 2 3
- 19. в). одновременное измерение прямого и бокового светорассеяния, без окраски клеток флуорес- центными красителями, позволяет выделить все
- 20. Субпопуляции лейкоцитов крови, выявляемые по степени гранулярности цитоплазмы (одномерный график на основе измерения бокового светорассеивания): Нейтрофил
- 21. Проточно-цитометрический анализ мононуклеарных клеток периферической крови пациента с В-клеточным хроническим лимфолейкозом (двумерная диаграмма) Прямое светорассеивание Боковое
- 22. 3. Оптическая система для измерения интенсивности как собственной флуоресценции клеток, так и пос- ле их предварительного
- 23. Одновременное измерение интенсивности флуорес- ценции восьми различных флуоресцентных красителей, которым были обработаны изучаемые клетки Полихромный флуоресценцентный
- 24. Флуорохромы (флуоресцентные красители): флюо-ресцеинизотиоцинат (FITC, λфлуор.= 530 nm), тетраме-тил-родамин (TRITC), фикоэритрин (PE, λфлуор.= 585 nm), белок
- 25. Спектральные характеристики некоторых современных флуоресцентных красителей для проточной цитометрии
- 26. Моноклональное антитело (МКА), конъюгирован- ное с флуорес- центным красите- лем (флуоресцеин изотиоцианат, ФИТЦ ). Клетки, с
- 27. Интенсивность флуоресценции пропорциональна количеству ФИТЦ-меченых МКА, связавшихся с клеткой
- 28. Информация, получаемая на основе анализа флуоресценции клеток 1. Измерение содержания различных пигментов (хлорофилл); 2. Сортировка клеток
- 29. Метод сортировки клеток суспензии на основе регистрации их флуоресценции после окрашивания флуресцентными красителями – получил название
- 30. Результирующий график сортировки клеток по экспрессии поверхностных антигенов CD14 и CD80 CD14 маркер клеток миелоидного ряда
- 31. Результирующая гистограмма количественного распределения CD80 и CD14 клеток по интенсивности флуоресценции
- 32. Пример иммуно-фенотипического анализа клеток с использованием проточной цитометрии Число клеток с определенной интенсивностью флюоресценции
- 33. Ядро Выявление апоптоза клеток по изменениям структуры плазматической мембраны методом проточной цитометрии с применением ФИТЦ и
- 34. Результат выявления проточной цитометрией апоптозных клеток с использованием двух флуорфоров Живые клетки Апоптозные клетки Мёртвые клетки
- 35. Проточная цитометрия - ведущий метод в клиничес-кой иммунологии и гематологии. Метод используют для решения следующих задач:
- 36. Области применения проточной цитометрии Иммунология Иммунофенотипирование клеток крови; Определение фагоцитарной активности; Определение внутриклеточных цитокинов и различ-
- 37. Оценка состояния иммунной системы; Оценка клеточного звена иммунитета (определение субпопуляций лимфоцитов); Оценка функциональной состоятельности иммуно- компетентных
- 38. Измерение физиологических параметров клетки (внутриклеточный pH, концентрация ионов Ca2+, потенциал клеточной мембраны). Гематология Анализ субпопуляционного состава
- 40. Скачать презентацию