Слайд 2
![Листерии впервые были выделены в 1926 г. англ. микробиологом Мюрреем](/_ipx/f_webp&q_80&fit_contain&s_1440x1080/imagesDir/jpg/150050/slide-1.jpg)
Листерии впервые были выделены в 1926 г. англ. микробиологом Мюрреем во
время эпизоотии у лабораторных животных в питомнике Кембриджского университета
у всех заболевших кроликов отмечался моноцитоз
Слайд 3
![Мюррей назвал м/о Bacterium monocytogenes В 1929 г. листерии были](/_ipx/f_webp&q_80&fit_contain&s_1440x1080/imagesDir/jpg/150050/slide-2.jpg)
Мюррей назвал м/о Bacterium monocytogenes
В 1929 г. листерии были выделены
от овец (одного из основных хозяев листерий) и от человека
В 1940 г. м/о был назван LISTERIA в честь англ. хирурга Листера
Слайд 4
![До 80-х годов листерии у человека выделяли исключительно редко С](/_ipx/f_webp&q_80&fit_contain&s_1440x1080/imagesDir/jpg/150050/slide-3.jpg)
До 80-х годов листерии у человека выделяли исключительно редко
С 1930г. по
1980г. в мире было зарегистрировано всего около 2000 случаев заболевания листериозом
Листериоз отмечался в сельской местности - у людей, контактировавших с животными (доярок, пастухов, фермеров)
Слайд 5
![С 80-х годов стали регистрироваться вспышки и спорадические случаи листериоза,](/_ipx/f_webp&q_80&fit_contain&s_1440x1080/imagesDir/jpg/150050/slide-4.jpg)
С 80-х годов стали регистрироваться вспышки и спорадические случаи листериоза, связанные
с употреблением пищевых продуктов
Крупнейшей является вспышка 1985 г. в Лос-Анджелесе , связанная с употреблением сычужного сыра. Было выявлено 142 больных, из них 48 – погибло
С тех пор листериоз стали рассматривать, как одну из пищевых инфекций
Слайд 6
![Листериоз – зооантропоноз Возбудитель выделяют от более, чем 100 видов](/_ipx/f_webp&q_80&fit_contain&s_1440x1080/imagesDir/jpg/150050/slide-5.jpg)
Листериоз – зооантропоноз
Возбудитель выделяют от более, чем 100 видов животных –домашних
(овец, коз, коров, свиней), грызунов; птиц; рыб; моллюсков; насекомых (клещей, блох)
Слайд 7
![У животных отмечают : аборты, маститы, поражения нервной системы, септич. явления Возможно здоровое носительство](/_ipx/f_webp&q_80&fit_contain&s_1440x1080/imagesDir/jpg/150050/slide-6.jpg)
У животных отмечают :
аборты,
маститы,
поражения нервной системы,
септич. явления
Возможно здоровое носительство
Слайд 8
![Основной резервуар возбудителя в природе — грызуны С-х. животные чаще](/_ipx/f_webp&q_80&fit_contain&s_1440x1080/imagesDir/jpg/150050/slide-7.jpg)
Основной резервуар возбудителя в природе — грызуны
С-х. животные чаще всего заражаются
через воду, корма, загрязнённые выделениями грызунов
Слайд 9
![Листерии очень устойчивые микроорганизмы Длительно сохраняются в окружающей среде: до](/_ipx/f_webp&q_80&fit_contain&s_1440x1080/imagesDir/jpg/150050/slide-8.jpg)
Листерии очень устойчивые микроорганизмы
Длительно сохраняются в окружающей среде:
до 3-х лет
в почве
в воде – 2-3 года
в кормах животных (фураже, силосе), в пищевых продуктах – многие месяцы
Слайд 10
![Температурный диапазон роста от 1 до +44° (размножаются в условиях](/_ipx/f_webp&q_80&fit_contain&s_1440x1080/imagesDir/jpg/150050/slide-9.jpg)
Температурный диапазон роста от 1 до +44° (размножаются в условиях холодильника)
Листерии
остаются жизнеспособными и при более высоких температурах (до 60°)
Не погибают при замораживании
Температурный оптимум - 25-37°
Растут в диапазоне рН от 6 до 9
Оптимальная рН 7,0-7,4
Выдерживают высокие концентрации соли – 15-24%
Слайд 11
![Пути заражения Листерии проникают в организм через слизистую пищеварительной системы,](/_ipx/f_webp&q_80&fit_contain&s_1440x1080/imagesDir/jpg/150050/slide-10.jpg)
Пути заражения
Листерии проникают в организм через слизистую пищеварительной системы, дыхательных путей
глаз, зева
1.Пищевой путь - при употреблении инфицированных пищевых продуктов (молока, сыра, мяса, рыбы, салатов, соков и пр.)
2.Трансмиссивный путь - при укусе насекомых (клещей, блох)
Слайд 12
![3. Контактный (от больных животных) 4. Аэрогенный (редко) 5.Трансплацетарный путь 6. Заражение в родах](/_ipx/f_webp&q_80&fit_contain&s_1440x1080/imagesDir/jpg/150050/slide-11.jpg)
3. Контактный (от больных животных)
4. Аэрогенный (редко)
5.Трансплацетарный путь
6. Заражение в
родах
Слайд 13
![Формы листериоза Инкубационный период от 10 до 60 дней Формы:](/_ipx/f_webp&q_80&fit_contain&s_1440x1080/imagesDir/jpg/150050/slide-12.jpg)
Формы листериоза
Инкубационный период от 10 до 60 дней
Формы:
1.Ангинозная форма –
лихорадка, ангина, конъюнктивит, увеличение лимфоузлов
2.Менингиты, энцефалиты
3. Эндокардиты
4. Септическая форма
Слайд 14
![5. Пищевая инфекция - проявляется тошнотой, рвотой, болями в животе,](/_ipx/f_webp&q_80&fit_contain&s_1440x1080/imagesDir/jpg/150050/slide-13.jpg)
5. Пищевая инфекция - проявляется тошнотой, рвотой, болями в животе, поносом,
повышением температуры до 38–39 градусов
Нередко через 3–4 дня состояние больного резко ухудшается, появляются признаки поражения ЦНС (менингит, энцефалит)
Слайд 15
![От человека человеку практически не передается Для всех форм -](/_ipx/f_webp&q_80&fit_contain&s_1440x1080/imagesDir/jpg/150050/slide-14.jpg)
От человека человеку практически не передается
Для всех форм - высокий моноцитоз
Заболеваемость
листериозом низкая:
в США регистрируют до 3000 случаев в год
на Украине до 30 случаев в год
Высокая смертность – 20%-40%
Слайд 16
![Классификация Род Листерия по Берджи относится к 19 группе –](/_ipx/f_webp&q_80&fit_contain&s_1440x1080/imagesDir/jpg/150050/slide-15.jpg)
Классификация
Род Листерия по Берджи относится к 19 группе – Гр+ неспорообразующие
палочки правильной формы
Включает 7 видов
В патологии человека и животных имеет значение 3 вида:
1. L. мonocytogenes – 90-95% патологии
2. L. ivanovii - 5-10%
Слайд 17
![3. L. seeligeri – вызывает заболевание у человека исключительно редко](/_ipx/f_webp&q_80&fit_contain&s_1440x1080/imagesDir/jpg/150050/slide-16.jpg)
3. L. seeligeri – вызывает заболевание у человека исключительно редко
Остальные виды
и L. seeligeri являются почвенными сапрофитами и могут встречаться в пищевых продуктах
Слайд 18
![Морфология Листерии – мелкие Гр+ палочки с закругленными концами Размерами](/_ipx/f_webp&q_80&fit_contain&s_1440x1080/imagesDir/jpg/150050/slide-17.jpg)
Морфология
Листерии – мелкие Гр+ палочки с закругленными концами
Размерами в ширину 0,5-1
мкм, в длину 1-3 мкм, иногда кокковидной формы
Склонны к полиморфизму, в старых культурах образуют нитевидные формы до 20-100 мкм длиной
Слайд 19
![Подвижны при 20°-25°С Имеют 1 или несколько жгутиков При 37°C - неподвижны Факультативные анаэробы](/_ipx/f_webp&q_80&fit_contain&s_1440x1080/imagesDir/jpg/150050/slide-18.jpg)
Подвижны при 20°-25°С
Имеют 1 или несколько жгутиков
При 37°C - неподвижны
Факультативные анаэробы
Слайд 20
![В мазке располагаются беспорядочно Могут располагаться в виде частокола или V и Yформы, напоминая коринебактерии](/_ipx/f_webp&q_80&fit_contain&s_1440x1080/imagesDir/jpg/150050/slide-19.jpg)
В мазке располагаются беспорядочно
Могут располагаться в виде частокола или V и
Yформы, напоминая коринебактерии
Слайд 21
![](/_ipx/f_webp&q_80&fit_contain&s_1440x1080/imagesDir/jpg/150050/slide-20.jpg)
Слайд 22
![Культуральные свойства Листерии не относятся к числу микроорганизмов, культивирование которых](/_ipx/f_webp&q_80&fit_contain&s_1440x1080/imagesDir/jpg/150050/slide-21.jpg)
Культуральные свойства
Листерии не относятся к числу микроорганизмов, культивирование которых представляет какие-либо
трудности
Для посева на листерии можно использовать широкий спектр питательных сред – МПА, сывороточный и кровяной агар, триптиказо-соевый агар и т. д.
Слайд 23
![Растут на простых средах, но медленно, поэтому к МПА добавляют](/_ipx/f_webp&q_80&fit_contain&s_1440x1080/imagesDir/jpg/150050/slide-22.jpg)
Растут на простых средах, но медленно, поэтому к МПА добавляют
глюкозу
(1%)
или глицерин (2%)
Оптимальная среда глюкозо (1%), глицерино (2%), сывороточный (3-5%) агар
Слайд 24
![На глюкозо-глицерин-сывороточном агаре колонии нежные, прозрачные голубовато-серые, круглые, выпуклые до 3 мм Рост через 24 часа](/_ipx/f_webp&q_80&fit_contain&s_1440x1080/imagesDir/jpg/150050/slide-23.jpg)
На глюкозо-глицерин-сывороточном агаре колонии нежные, прозрачные голубовато-серые, круглые, выпуклые до 3
мм
Рост через 24 часа
Слайд 25
![На МПА с 1% глюкозы образуют мелкие (0,5-2 мм) голубовато-серые](/_ipx/f_webp&q_80&fit_contain&s_1440x1080/imagesDir/jpg/150050/slide-24.jpg)
На МПА с 1% глюкозы образуют мелкие (0,5-2 мм) голубовато-серые круглые
выпуклые колонии - росинки
В первые сутки колонии еле заметны
Характерный рост отмечается через 48 часов
На КА через 24 часа образуют голубовато-белые колонии до 2 мм с бета или альфа гемолизом
Слайд 26
![При длительном культивировании могут образовывать R- формы - шероховатые, с](/_ipx/f_webp&q_80&fit_contain&s_1440x1080/imagesDir/jpg/150050/slide-25.jpg)
При длительном культивировании могут образовывать R- формы - шероховатые, с утолщённым
краем, диаметром 1-3 мм
S-R-переход сопровождается снижением гемолитической активности и потерей вирулентности
На средах с глюкозой дают характерный запах творога или кислого молока
Слайд 27
![В жидких средах листерии дают равномерное помутнение, осадок Осадок слизистый,](/_ipx/f_webp&q_80&fit_contain&s_1440x1080/imagesDir/jpg/150050/slide-26.jpg)
В жидких средах листерии дают равномерное помутнение, осадок
Осадок слизистый, плотный, иногда
поднимается в виде косички
В полужидких средах листерии дают характерный рост по уколу, более обильный у поверхности с образованием «купола» и спускающегося вниз хвостика (зонтик)
Слайд 28
![Рост спорадических случаев и вспышек листериоза способствовал выявлению многочисленных уязвимых](/_ipx/f_webp&q_80&fit_contain&s_1440x1080/imagesDir/jpg/150050/slide-27.jpg)
Рост спорадических случаев и вспышек листериоза способствовал выявлению многочисленных уязвимых мест
традиционной диагностики
Так, в мазках листерии морфологически могут быть сходны с дифтероидами и Гр+ кокками
Слайд 29
![Выделение возбудителя из контаминированного клинического материала и продуктов питания оказалось](/_ipx/f_webp&q_80&fit_contain&s_1440x1080/imagesDir/jpg/150050/slide-28.jpg)
Выделение возбудителя из контаминированного клинического материала и продуктов питания оказалось малоэффективным
без селективных компонентов
В 80-е годы были созданы селективные среды значительно повышающие эффективность выделения и сократившие сроки идентификации L.monocytogenes
Слайд 30
![Основные селективные компоненты, используемые при выделении листерий Хлорид лития Теллурит](/_ipx/f_webp&q_80&fit_contain&s_1440x1080/imagesDir/jpg/150050/slide-29.jpg)
Основные селективные компоненты, используемые при выделении листерий
Хлорид лития
Теллурит калия
Налидиксовая кислота
Акрифлавин
Циклогексимид
Антибиотики
(цефтазидим, полимиксин B)
Эскулин
Слайд 31
![Селективные и дифференциально-диагностические среды МПА + 0,05% теллурита калия +2%](/_ipx/f_webp&q_80&fit_contain&s_1440x1080/imagesDir/jpg/150050/slide-30.jpg)
Селективные и дифференциально-диагностические среды
МПА + 0,05% теллурита калия +2% глицерина +1%
глюкозы. Добавление 5-10% сыворотки крови улучшает рост листерий. Образуют колонии черного цвета
Наибольшее распространение для выделения листерий получили Оксфорд агар и PALCAM агар
Слайд 32
![PALCAM - агар Состав - полимиксин, акрифлавин, лития хлорид, цефтазидим,](/_ipx/f_webp&q_80&fit_contain&s_1440x1080/imagesDir/jpg/150050/slide-31.jpg)
PALCAM - агар
Состав - полимиксин, акрифлавин, лития хлорид, цефтазидим, эскулин, маннит,
глюкоза, цитрат железа, фенол.-красный
Среда красного цвета
Листерии гидролизуют эскулин, который реагируя с цитратом железа образует коричнево-черный комплекс
Слайд 33
![Через 24 ч. листерии образуют колонии диаметром 1-2 мм серо-зеленого](/_ipx/f_webp&q_80&fit_contain&s_1440x1080/imagesDir/jpg/150050/slide-32.jpg)
Через 24 ч. листерии образуют колонии диаметром 1-2 мм серо-зеленого цвета
с черным ободком и черным центром
Большинство м/о подавляется
Стафилококки и энтерококки образуют оранжевые и желтые колонии (за счет ферментации маннита) без почернения
Слайд 34
![Рост Listeria monocytogenes на селективном агаре PALCAM](/_ipx/f_webp&q_80&fit_contain&s_1440x1080/imagesDir/jpg/150050/slide-33.jpg)
Рост Listeria monocytogenes
на селективном агаре
PALCAM
Слайд 35
![Оксфорд-агар (и бульон) Состав – литий, эскулин, глюкоза, цитрат железа,](/_ipx/f_webp&q_80&fit_contain&s_1440x1080/imagesDir/jpg/150050/slide-34.jpg)
Оксфорд-агар (и бульон)
Состав – литий, эскулин, глюкоза, цитрат железа, акрифлавин, колистин,
фосфомицин
Среда темно-янтарного цвета
Через 24-48 часов вырастают колонии серого цвета до 2 мм с темным ореолом
В бульоне – помутнение, потемнение, осадок
Слайд 36
![Рост L. monocytogenes на Оксфордском агаре](/_ipx/f_webp&q_80&fit_contain&s_1440x1080/imagesDir/jpg/150050/slide-35.jpg)
Рост L. monocytogenes
на Оксфордском агаре
Слайд 37
![В качестве сред обогащения обычно используют различные варианты триптиказо-соевого бульона](/_ipx/f_webp&q_80&fit_contain&s_1440x1080/imagesDir/jpg/150050/slide-36.jpg)
В качестве сред обогащения обычно используют различные варианты триптиказо-соевого бульона с
дрожжевым экстратом и селективными компонентами
Бульон Фрезера
Слайд 38
![Среды разработанные ИМИ им. И.И. Мечникова Среда обогащения для бактериальных](/_ipx/f_webp&q_80&fit_contain&s_1440x1080/imagesDir/jpg/150050/slide-37.jpg)
Среды разработанные ИМИ им. И.И. Мечникова
Среда обогащения для бактериальных форм листерий
(СОБФЛ) – МПБ, LiCl, налидиксовая к-та, глюкоза
Среда обогащения для L-форм листерий (СОLФЛ) (+ NaCl, 5% сыворотки)
ЛНЭАЛ - элективный агар для листерий
ЛНЭАЛ-L- элективный агар для L-форм
Слайд 39
![Биохимические свойства Каталаза + Оксидаза - Ферментируют с образованием кислоты](/_ipx/f_webp&q_80&fit_contain&s_1440x1080/imagesDir/jpg/150050/slide-38.jpg)
Биохимические свойства
Каталаза +
Оксидаза -
Ферментируют с образованием кислоты (без Г) глюкозу, мальтозу,
рамнозу, эскулин, салицин
Не ферментируют маннит
Индол-
Н2S -
Мочевину не гидролизуют
МК и ФП+
Слайд 40
![Антигены У листерии выделяют О- и Н- антигены По структуре](/_ipx/f_webp&q_80&fit_contain&s_1440x1080/imagesDir/jpg/150050/slide-39.jpg)
Антигены
У листерии выделяют О- и Н- антигены
По структуре 14 соматических
О-Аг и 5 Н-АГ выделено 16 сероваров: 1/2а, 1/2в, 1/2с, 3а-с, 4а-d, 5, 6, 7.
Три серовара (1/2а, l/2b, 4b ) вызывают 90% всех случаев листериоза человека
Имеются диагностикумы для РИФ, ИФА
Слайд 41
![Факторы патогенности Листериозин О –гемолизин, обладает токсическим эффектом. Способствует размножению](/_ipx/f_webp&q_80&fit_contain&s_1440x1080/imagesDir/jpg/150050/slide-40.jpg)
Факторы патогенности
Листериозин О –гемолизин, обладает токсическим эффектом. Способствует размножению листерий в
фагоцитах
ЛПС – эндотоксин (листерия единственная Гр+ бактерия, которая имеет ЛПС сходный с Гр- ЛПС)
Ферменты патогенности (лецитиназа, фосфолипаза и др.)
Слайд 42
![Этапы взаимодействия с клеткой организма Лизис первичной вакуоли Деление в](/_ipx/f_webp&q_80&fit_contain&s_1440x1080/imagesDir/jpg/150050/slide-41.jpg)
Этапы взаимодействия с клеткой организма
Лизис первичной вакуоли
Деление в цитоплазме клетки
Полимеризация актина,
необходимая для передвижения листерий по цитоплазме
Проникновение в соседнюю клетку путем продавливания мембраны и образования инвагинации в соседнюю клетку
Новый цикл деления в соседней клетке.
Слайд 43
![Проникновение в соседнюю клетку](/_ipx/f_webp&q_80&fit_contain&s_1440x1080/imagesDir/jpg/150050/slide-42.jpg)
Проникновение в соседнюю клетку
Слайд 44
![Лабораторная диагностика Кровь 1. Засевают в количестве 10 мл в](/_ipx/f_webp&q_80&fit_contain&s_1440x1080/imagesDir/jpg/150050/slide-43.jpg)
Лабораторная диагностика
Кровь
1. Засевают в количестве 10 мл в 100
мл селективной среды (Оксфорд-бульон, Фрейзера, СОБФЛ)
2.В случае отсутствия - в МПБ с 1% глюкозы
3.0,5 мл из бульона засевают на плотную селективную среду. В случае отсутствия на МПА+1% глюкозы+2%глицерина.
Слайд 45
![СМЖ центрифугируют - из осадка делают мазки, окрашивают 1. по](/_ipx/f_webp&q_80&fit_contain&s_1440x1080/imagesDir/jpg/150050/slide-44.jpg)
СМЖ центрифугируют
- из осадка делают мазки, окрашивают
1. по
Граму
2. иммунофлюоресцентной листериозной сывороткой
- посев на плотную селективную среду (или МПА + глюкоза + глицерин) и 5% КА
- 2-3 мл в жидкую селективную среду или МПБ с 1% глюкозы
Слайд 46
![Моча, околоплодные воды (как СМЖ) Отделяемое из зева, носа, глаз](/_ipx/f_webp&q_80&fit_contain&s_1440x1080/imagesDir/jpg/150050/slide-45.jpg)
Моча, околоплодные воды (как СМЖ)
Отделяемое из зева, носа, глаз и влагалища
втирают в плотную селективную среду
Затем тампон отмывают в 1 мл физ. р-ра и смывную жидкость вносят в 5мл жидкой селективной среды
Слайд 47
![Испражнения, меконий : - 1г засевают в жидкую селективную среду](/_ipx/f_webp&q_80&fit_contain&s_1440x1080/imagesDir/jpg/150050/slide-46.jpg)
Испражнения, меконий :
- 1г засевают в жидкую селективную среду обогащения
в соотношении 1:5-1:10.
- 0,5 мл после суспенд. в жидкой среде засевают на плотные селективные среды
Слайд 48
![Из трупных органов и тканей делают по 2 мазка-отпечатка и](/_ipx/f_webp&q_80&fit_contain&s_1440x1080/imagesDir/jpg/150050/slide-47.jpg)
Из трупных органов и тканей делают по 2 мазка-отпечатка и окрашивают
1. по Граму
2. иммунофлюоресцентной сывороткой.
Ткани гомогенизируют с физ. р-ром в соотношении 1:5 и высевают 0,5 мл на плотные и 2 мл в жидкие селективные среды.
Посевы инкубируют при 37о 24-48 ч.
Слайд 49
![2 этап. Через 24-48 часов при наличии роста из подозрительных](/_ipx/f_webp&q_80&fit_contain&s_1440x1080/imagesDir/jpg/150050/slide-48.jpg)
2 этап. Через 24-48 часов при наличии роста из подозрительных колоний
делают мазки, окрашивают по Граму и РИФ
С плотных сред пересев на скошенный МПА с 1% глюкозы для накопления чистой культуры
Со сред обогащения через 48 часов ( не зависимо от наличия роста) пересев на глюкозо-глицерин-сывороточный агар и на 5% КА (при отсутствии роста через 72 ч. – отрицательный ответ)
Слайд 50
![3 этап. Идентификация культуры: Окраска по Граму (короткие Гр+ палочки)](/_ipx/f_webp&q_80&fit_contain&s_1440x1080/imagesDir/jpg/150050/slide-49.jpg)
3 этап. Идентификация культуры:
Окраска по Граму (короткие Гр+ палочки)
Каталаза (+)
Определение подвижности
– посев в 2 пробирки с полужидким агаром; инкубация при 25 и 37о 48-72 ч. (при 25 всегда подвижны – образуют «зонтик» у поверхности пробирки)
Учет гемолиза (чаще бета-гемолиз)
Посев на среды Гиса (с ксилозой, рамнозой, салицином)
Слайд 51
![САМР-тест с гемолитическими штаммами S. aureus и R. equi S.](/_ipx/f_webp&q_80&fit_contain&s_1440x1080/imagesDir/jpg/150050/slide-50.jpg)
САМР-тест с гемолитическими штаммами
S. aureus и R. equi
S. aureus и
R. equi засевают на КА параллельными штрихами на расстоянии 5 см.
Перпендикулярно засевают до 6 штаммов исследуемых листерий на расстоянии 1 см друг от друга и 2 мм от линий стафилококка и родококка.
Инкубируют при 37о 24-48 ч.
Слайд 52
![L. мonocytogenes дает расширение зоны гемолиза возле стафилококка и отсутствие](/_ipx/f_webp&q_80&fit_contain&s_1440x1080/imagesDir/jpg/150050/slide-51.jpg)
L. мonocytogenes дает расширение зоны гемолиза возле стафилококка и отсутствие усиления
гемолиза у родококка
L. ivanovii дает расширение зоны гемолиза возле родококка и отсутствие усиления гемолиза у стафилококка
При отсутствии в музее культуры родококка разрешается постановка теста только со стафилококком
Слайд 53
![Дифференциальная диагностика L. мonocytogenes L. ivanovii Ксилоза - + Рамноза](/_ipx/f_webp&q_80&fit_contain&s_1440x1080/imagesDir/jpg/150050/slide-52.jpg)
Дифференциальная диагностика
L. мonocytogenes L. ivanovii
Ксилоза - +
Рамноза + -
САМР-тест
стаф.+ стаф.-
L. мonocytogenes Corynebacterium
Подвижность + -
Рост на селект. ср. + -
Салицин + -
эскулин + -
Слайд 54
![Выявление листерий в пищевых продуктах Метод гармонизирован с международным стандартом](/_ipx/f_webp&q_80&fit_contain&s_1440x1080/imagesDir/jpg/150050/slide-53.jpg)
Выявление листерий в пищевых продуктах
Метод гармонизирован с международным стандартом ISO 11290.
Проводится соответственно приказу № 558 от 2006 г. и МУ «Организация контроля и методы выявления в пищевых продуктах и продовольственном сырье»
Применяются питательные среды международного образца
Слайд 55
![1 день Готовят навески 25г продукта и засевают в среду](/_ipx/f_webp&q_80&fit_contain&s_1440x1080/imagesDir/jpg/150050/slide-54.jpg)
1 день
Готовят навески 25г продукта и засевают в среду для первичного
обогащения - бульон Фрезера с пониженной концентрацией а/б, в соотношении 1:9 (в 225 мл)
Инкубируют при 37о 24 часа
При появление роста – потемнение среды
Слайд 56
![2 день Независимо от наличия роста 0,1 мл пересевают в](/_ipx/f_webp&q_80&fit_contain&s_1440x1080/imagesDir/jpg/150050/slide-55.jpg)
2 день
Независимо от наличия роста 0,1 мл пересевают в 10 мл
бульона для вторичного обогащения (б-н Фрезера с полной концентрацией а/б)
Инкубируют 24-48 часов при 37о
Потемнение среды при появлении роста
Слайд 57
![3-4 день Независимо от наличия роста пересев по 0,1 мл](/_ipx/f_webp&q_80&fit_contain&s_1440x1080/imagesDir/jpg/150050/slide-56.jpg)
3-4 день
Независимо от наличия роста пересев по 0,1 мл на 2
чашки с плотной селективной средой
1. Оксфорд-агар
2. PALCAM-агар
Инкубируют при 37о 24-48 часов
При отсутствии роста дается отрицательный результат
Слайд 58
![При наличии роста: PALCAM-агар – серо-зеленые с черным ореолом Оксфорд-агар](/_ipx/f_webp&q_80&fit_contain&s_1440x1080/imagesDir/jpg/150050/slide-57.jpg)
При наличии роста:
PALCAM-агар – серо-зеленые с черным ореолом
Оксфорд-агар – серые
с черным ореолом
Отбирают 3-5 колоний и пересевают: на ТСЕДА
Инкубируют при 37о 24ч.
Слайд 59
![Из чистых культур делают мазки, красят по Граму (короткие Гр+](/_ipx/f_webp&q_80&fit_contain&s_1440x1080/imagesDir/jpg/150050/slide-58.jpg)
Из чистых культур делают мазки, красят по Граму (короткие Гр+ палочки)
Тест
на каталазу (+)
Определяют подвижность (2 пробирки инкубируют при 25 и при 37 в течение 48-72 часов)
Определяют утилизацию маннита (-), ксилозы(-), рамнозы(+)
Постановка САМР-теста
Определение лецитиназной активности
Слайд 60
![Лецитиназная активность На среде с активированным углем и желтком L.](/_ipx/f_webp&q_80&fit_contain&s_1440x1080/imagesDir/jpg/150050/slide-59.jpg)
Лецитиназная активность
На среде с активированным углем и желтком L. мonocytogenes образует
лецитиназу, дает зону помутнения вокруг колнии
L. ivanovii образует лецитиназу на среде с углем и без угля
Ост. листерии лецитиназу не образуют
Слайд 61
![Тест-система для идентификации листерий Микроген Listeria-ID Состав набора: 1) Стрипы](/_ipx/f_webp&q_80&fit_contain&s_1440x1080/imagesDir/jpg/150050/slide-60.jpg)
Тест-система для идентификации листерий Микроген Listeria-ID
Состав набора:
1) Стрипы с лунками
– 20 шт.
2) Бульон для разведения (флакон стеклянный 3 мл)- 20 шт.
3) Реагент Гемолизин для теста на гемолитическую активность (флакон стеклянный 5 мл)- 1 шт.
Слайд 62
![](/_ipx/f_webp&q_80&fit_contain&s_1440x1080/imagesDir/jpg/150050/slide-61.jpg)