Содержание
- 2. Продолжая работы Ру, Росс Гаррисон усовершенствовал методику «висячей капли». Он использовал небольшие кусочки ткани, отторгнутые от
- 3. В 1913 г. Алексис Каррель применил плазму крови, обогащенную эмбриональным экстрактом. Примененная методика обеспечивала значительно большую
- 4. Впервые клоны клеток в культуре из одиночной клетки были получены Эрлом с сотрудниками в 1948 г.
- 5. Предел, или лимит, Хейфлика – граница количества делений соматических клеток. Эта граница была найдена в культурах
- 6. В настоящее время практически любые клетки человека и животных могут быть введены в культуру и, тем
- 7. Эндотелиоцит человека
- 8. Раковая клетка молочной железы человека
- 10. Кардиомиоциты крысы
- 11. Гепатоциты бабуина Нейроны гиппокампа
- 12. Клетки HeLa
- 13. Первичная культура почечной ткани обезьяны
- 14. Культура перевиваемой линии
- 15. Фибробластоподобные клетки в культуре ткани
- 16. Наибольшее распространение получили культуры фибробластов. Широкое использование фибробластов обусловлено не только легкостью их культивирования, но и
- 17. Культуральные системы животных клеток По характеру и длительности существования культуры животных клеток можно подразделить на первичные
- 18. Лишь отдельные клетки или группы клеток на фоне дегенерации большей части популяции могут сохранить способность к
- 19. Таким образом, различают 3 основных типа культур животных клеток: первичные культуры, получаемые практически из любого органа
- 20. Как правило, культуры, полученные из эмбриональных тканей, характеризуются лучшей выживаемостью и более активным ростом по сравнению
- 21. Получение клеточных линий на основе клеток первичных и диплоидных культур Клетки первичной культуры обычно гетерогенны и
- 22. В случае механической дезагрегации фрагмент ткани измельчают до кусочков размером около 1 мм и отмывают от
- 23. Культуры первичных клеток легко получить из многих тканей. Они существуют 20-30 суток и дают начало диплоидным
- 24. Отбор осуществляют при регулярной смене питательной среды, омывающей монослой. Смену среды производят регулярно, не реже 1
- 25. Постоянные культуры У полученных клеточных линий есть 2 пути: После нескольких пересевов линия клеток 1. либо
- 26. Таким образом, постоянные клеточные линии имеют определенные преимущества: высокая скорость роста, возможность достижения более высокой плотности
- 27. Системы культивирования клеток Существует 2 основных системы культивирования клеток. 1. Непроточные культуры - тип культур, в
- 28. Увеличить продолжительность жизни непроточных культур можно несколькими способами: - прерывистый (часть культуры заменяется равным объемом свежей
- 29. 2. Проточные культуры обеспечивают истинные гомеостатические условия. Характеризующиеся постоянством концентрации питательных веществ и метаболитов, а также
- 30. Монослойные культуры также обладают рядом преимуществ: 1. Монослойные культуры могут быть применены к любому типу клеток,
- 31. Недостатками монослойных культур являются: 1. необходимость большого пространства; 2. возрастание стоимости и трудоемкости при увеличении масштаба;
- 37. Монослойные культуры Большинство нетрансформированных клеток млекопитающих могут расти только в виде монослоя, будучи прикрепленными к субстрату
- 38. Прикрепление клетки к субстрату Животные клетки в культуре в процессе деления
- 39. Поверхности клеток животных и поверхности традиционных культуральных сосудов из стекла и пластика, обладающие высокой поверхностной энергией,
- 40. В 1990 году группой японских ученых был разработан субстрат для культивирования клеток на основе поли-N-изопропилакриламида (ПНИПА),
- 41. Основным недостатком применяемых в настоящее время методик приготовления субстратов ПНИПА является необходимость ковалентного связывания ПНИПА с
- 42. Монослойное культивирование осуществляют во флаконах (флаконы Ру – самые большие стационарные флаконы, поверхностью до 200 кв.см
- 43. При достижении плотного монослоя наблюдается снижение распластывания клеток и их ошаривание. Ослабленным контактным торможением характеризуются трансформированные
- 45. Клетки, трансформированные in vitro ретровирусом (вирус саркомы Рауса), несущим температурочувствительную мутацию в онкогене. Округленная форма трансформированных
- 46. По мере роста клеточного монослоя нетрансформированных клеток происходят следующие изменения: клетки становятся более скученными и менее
- 47. Если из плотного монослоя нетрансформированных клеток удалить часть пласта, то в клетках, находящихся по краям удаленного
- 48. Клеточную культуру перевивают после достижения ее плотного монослоя или когда добавленный в среду индикатор (обычно феноловый
- 49. Образование монослоя кератиноцитов из кожи лица взрослых доноров на 1, 3, 6 сутки
- 50. Процесс подготовки клеточного монослоя к отделению от стекла и формированию суспензии вследствие обработки 0,02% раствором химопсина
- 51. После чего клетки центрифугируют при 200-400 – 1000 об/мин около 5 мин, и осадок отслоенных клеток
- 52. Помимо стационарного монослойного культивирования используют и динамическое. «Роллерные культуры» - метод культивирования, при котором клеточный монослой
- 53. Посевная концентрация в 1 мл среды составляет для клеток HeLa, L - 60-80 тыс., для диплоидных
- 54. Суспензионное культивирование В 1953 г. Оуенс с сотрудниками получили первые суспензионные культуры животных клеток, которые удобнее
- 55. Иногда этого бывает достаточно для получения суспензионной культуры, но обычно требуются специальные сосуды для культивирования суспензий
- 56. Однако такие манипуляции при введении клеток в суспезию необходимы не во всех случаях. Некоторые клетки (трансформированные
- 57. Суспензионные культуры лучше растут внутри ограниченного диапазона концентраций клеток и в том случае, когда сосуд наполнен
- 58. Максимальный рост клеток в суспензии наблюдают при рН 7,0-7,2. Питательные среды, применяемые для выращивания клеток в
- 59. Суспензионное культивирование дает по меньшей мере 2-3-х кратную экономию питательных сред, по сравнению с общепринятым стационарным
- 60. Монослойное культивирование на микроносителях Сочетать положительные стороны монослойного и суспензионного культивирования позволяет использование системы с микроносителями.
- 61. Преимущества: создание одинаковых контролируемых условий во всем объеме сосуда; получение высокой плотности клеточной популяции (до нескольких
- 62. Требования к микроносителям: Микроносители не должны быть: - токсичными, - не сорбировать компоненты питательных сред и
- 63. Коммерческие классические микроносители имеют диаметр 100-250 мкм и подразделяются на 6 основных групп: декстрановые микроносители поперечно
- 64. полистиреновые микроносители (Биосилон, цитосферес). Не имеют пористой структуры, что предупреждает сорбцию питательной среды; стеклянные микроносители (Биогласс).
- 65. В противоположность суспензионным культурам клеток на микроносителях разработаны способы инкапсулирования их в полимерные сферы (полилизиновые, агарозные,
- 67. Миобласты, прикрепленные к шарообразным микроносителям, в которых растут обозначенные зелёным взрослые клетки скелетных мышц
- 68. Мультиклеточные опухолевые сфероиды (аденокарцинома человека MCF-7) в альгинат-хитозановых микрокапсулах.
- 69. Микроноситель с полимерной поверхностью, выполненной из природных полимеров клеточной стенки пыльцы.
- 70. Питательные среды и условия культивирования После извлечения клеток из ткани или органа культуральная среда должна обеспечивать
- 71. Основу питательных сред составляют солевые растворы. Минеральные компоненты в этих растворах подобраны так, что раствор выполняет
- 72. Другим важным условием культивирования является осмотическое давление. Оно определяется числом молей осмотически активных частиц (ионов и
- 73. Стандартные среды для культур животных клеток Среды Игла MEM (minimal essential medium) и BME (basal medium,
- 74. Среда МакКоя 5А и серия сред RPMI. Среда МакКоя 5А разработана в 1958 году для поддержания
- 75. Нормальные, сохраняющие специфические функции клетки на стандартных средах не размножаются (если они не трансформированы). Для оптимизации
- 76. Белки сыворотки, прямо и специфически участвующие в стимуляции клеточного деления, называются факторами роста. Большинство ростовых факторов
- 77. Для переноса низкомолекулярных факторов (витаминов, аминокислот, липидов и других) необходимы транспортные белки. В этой роли выступает
- 78. Культивирование клеток в присутствии сыворотки обнаруживает и ряд недостатков: для большинства тканей сыворотка не является физиологической
- 79. В настоящее время предпринимаются попытки создания и применения бессывороточных питательных сред, в которых сыворотка заменяется смесью
- 80. Следовательно, оптимизация состава питательных сред для культур животных клеток развивается в двух направлениях – разработка сред,
- 81. Одна из проблем, возникающих при попытках получить культуры одиночных клеток или культуры клеток с низкой плотностью
- 82. Культивирование клеток и тканей беспозвоночных Интерес к клеточным культурам беспозвоночных связан с разнообразием и оригинальностью роста
- 83. Первые попытки культивирования клеток насекомых были предприняты в начале 20-го века. Однако среди ученых длительное время
- 84. Интенсивные исследования проблемы начались именно в 60-х гг., когда Грейс, модифицировав среду Вьятта, получил первые четыре
- 85. Лучшие источники для получения культивируемых клеток - личинки и куколки насекомых. Методика получения первичных культур клеток
- 86. Среды для культивирования клеток и тканей насекомых сильно варьируют по составу. При составлении питательных сред часто
- 87. Культуры клеток беспозвоночных животных также представляют огромный интерес для изучения молекулярных механизмов взаимодействия хозяин-паразит, роли мобильных
- 88. Биореакторы для культур клеток Клетки животных во многом отличаются от микробных и растительных клеток, имеющих клеточные
- 89. Для предотвращения повреждения клеток пузырьками воздуха уменьшают объем подаваемой газовой смеси, используют поверхностную продувку или аэрацию
- 90. Клеточный ферментер (компания Bioengineering) Клеточный ферментер представляет собой резервуар с мешалкой. Он доступен в пилотном и
- 92. Эрлифтный ферментер В этих ферментерах перемешивание осуществляется потоком воздуха, а не лопастью мешалки, обеспечивая эффективный массоперенос
- 94. Многие клетки млекопитающих растут только будучи прикрепленными к поверхности. Такие опорнозависимые клетки иммобилизуют на микроносителях. Если
- 95. Биореакторы с взвешенной твердой фазой рекомендуются для клеток на микроносителях, для клеток, чувствительных к раневому стрессу,
- 96. Для опорнозависимых клеток можно также использовать биореактор с фиксированной твердой фазой (fixed bed reactor), в котором
- 99. Скачать презентацию