Содержание
- 2. Эквивалентный размер пиксела – размер пиксела камеры при проекции его в пространство предметов. Эквивалентный размер пиксела
- 3. Увеличение объектива только примерно равно указанному на оправе. Точное увеличение может отличаться на 2-3% от паспортного.
- 4. Уменьшение эквивалентного размера пиксела приводит к уменьшению количества света, попадающего на него, что аналогично эффекту уменьшения
- 5. Для однозначного восстановления (передачи) непрерывного периодического сигнала с помощью дискретной (цифровой) записи частота измерения величины сигнала
- 6. Теорема гласит, что для записи изображения без существенной потери информации эквивалентный размер пиксела должен быть по
- 7. Контраст дискретного изображения всегда меньше, чем непрерывного. Основной вопрос – насколько? Так как научная камера позволяет
- 8. Недостаточная пикселизация изображения Максимальный эквивалентный размер пиксела, диктуемый телеграфной теоремой (1/2 радиуса диска Эри), в случае,
- 9. Пикселизация изображения Исходя из критерия Рэлея, для сохранения положительного контраста при произвольном расположении точек в объекте,
- 10. Съемка с максимальным разрешением В большинстве микроскопов использование камеры со стандартной установкой (то есть без промежуточного
- 11. Максимально допустимый размер пиксела камеры для некоторых объективов при прямой съемке х100/1.3 (имм.) – 10 мкм
- 12. Теорема дискретизации для конфокальной микроскопии i) Предел разрешения: 0.4 x wavelength/NA = Resolvable Distance ii) Теорема
- 13. Минимальная дискретизация (Nyquist sampling) Пример: Объектив 100x, 1.40 NA, 530 nm (ФИТЦ) Теоретическое разрешение = 0.15
- 14. Растяжение (zooming) Масштабирование означает, что вы используете тот же растр (число шагов), скорость сканирования и освещение
- 15. Пример минимального расчета Объектив X10 с апертурой 0.3 для изображения GFP: (0.4 x 520)/0.3 = 693nm
- 16. Скорость сканирования: разрешение по времени В современных микроскопах скорость измеряется в герцах и составляет от 1000
- 17. Дискретизация по оси z Каково необходимое расстояние по оси z ? Оптимум – менее половины от
- 18. Недостаточная и избыточная дискретизация Избыточная дискретизация (пикселы маленькие по сравнению с оптическим разрешением): Изображение «гладкое» и
- 19. 1 проход 16 проходов PlanApo 63x Лазер 488 нм 80% ФЭУ - 800 В Среднее усиление
- 20. Шум в цифровом изображении Определение: шум это любая неоднородность в измерениях, которая не связана с изменением
- 21. В идеально работающем детекторе при однородном естественном фоне отношение сигнал/шум (S/N или SNR) может быть рассчитано
- 22. Зависимость отношения сигнал/шум от экспозиции Одно и то же поле записано с выдержками 1,12 и 4,48
- 23. Фотоэлектронный умножитель получает свет через стеклянное или кварцевое окно, покрытое фоточувствительной поверхностью – фотокатодом, который испускает
- 24. Детектор сигналов – ФЭУ Фотоэлектронный умножитель (ФЭУ) – вакуумный прибор. Фотоэлектронный умножитель (ФЭУ) представляет собой электровакуумный
- 25. Кривая светочувствительности ФЭУ Современные ФЭУ имеют удовлетворительную чувствительность в диапазоне 500-650 нм, но быстро теряют ее
- 26. ФЭУ на арсениде галлия (GaAsP) Максимальная чувствительность детектора GaAsP в диапазоне 450-650 нм достигает 45%, в
- 27. Настройка ФЭУ Настройка ФЭУ состоит в подборе усиления и пьедестального напряжения. (а) исходный сигнал; (b) после
- 28. Факторы, определяющие качество изображения Пространственное разрешение Определяется оптикой, но может ухудшаться при недостаточной плотности сканирования. Возможность
- 29. Критические параметры ЛСКМ Настройка лазера (мощность) Апертура и увеличение объектива Размер пиксела (шага) при сканировании и
- 30. Конфокальные компромиссы
- 31. Перекрывание спектров эмиссии Перекрывание спектров эмиссии неизбежно при использовании нескольких красителей, возбуждаемых от одного лазера (при
- 32. Компенсация При использовании нескольких красителей возникает проблема перекрывания спектров флуоресценции. Проблема усугубляется с ростом числа красителей.
- 33. Сравнение пар красителей FITC TRITC ~20% FITC Texas Red ~3%
- 34. Затекание сигналов
- 35. Затекание сигналов Как уменьшить затекание сигналов: Использовать флуорохромы с дальше отстоящими спектрами. Например, FITC + Texas
- 36. Запись изображения в нескольких каналах Варианты записи: одновременно (хуже) или последовательно (лучше, но дольше). Основная трудность
- 37. Разделение перекрывающихся сигналов Для уменьшения эффекта затекания применяются несколько подходов: Сдвиг полосы пропускания детектора. Использование дифракционной
- 38. Параллельное и последовательное сканирование Слева: красный и зеленый каналы перекрываются, справа – каналы полностью разделены.
- 39. Последовательное сканирование Спектры флуоресценции снимаются последовательно при возбуждении разными лазерами.
- 40. Запись спектров с помощью щелевого детектора
- 41. Анализ спектров Спектры анализируются для каждой точки изображения и сравниваются со спектрами из библиотеки (записанной в
- 42. Запись спектров с помощью щелевого детектора Ширина и положение щели перед детектором регулируются – таким образом
- 43. Результаты разделения Слева – суммарная картина, справа – после вычитания спектра автофлуоресценции. Сохранен сигнал только от
- 44. Системы спектральной детекции Слева – последовательная (за счет поворота решетки), справа – параллельная (панель с 32
- 45. Спектральный детектор Никон 32-канальный детектор с регулируемой шириной щели – 2.5, 6 и 10 нм на
- 46. Спектральный детектор Линейка из ФЭУ позволяет одновременно записывать сигнал в 32 каналах для последовательных длин волн
- 47. Спектральный детектор Галерея из 32 картинок препарата, окрашенного DAPI и Alexa 488 Регулируемый детектор позволяет выделять
- 48. Лямбда стек (Lambda stack) Лямбда стек или спектральный куб – набор изображений, записанных при различных длинах
- 49. Запись стека для трех белков
- 50. Возможности спектрального детектора Быстрая запись изображения в 32 каналах. Возможность разделения перекрывающихся спектров (spectral unmixing). Разделение
- 51. Разделение спектров Можно разделить спектры, максимумы которых отстоят не менее, чем на 6-10 нм при условии,
- 52. Разделение спектров - стек
- 53. Разделение спектров - результат
- 55. Скачать презентацию