Содержание
- 2. В 1869г. И. Мишером была открыта ДНК. В 1944г ряд экспериментов О. Эвери, К. Мак-Леода и
- 3. Значение для современной науки и медицины Решение самых различных научных задач Генотипирование организмов Диагностика инфекционных заболеваний
- 4. Основные достоинства ПЦР Высокая чувствительность Высокая специфичность Проста в исполнении Нет необходимости в выделении или сложной
- 5. Стадии ПЦР Денатурация (94°C) Обеспечивает разделение нитей ДНК Гибридизация (отжиг) праймеров на матрице (45-65°C) Формирует структуры
- 6. Схема ПЦР Денатурация Отжиг праймеров Синтез 1 копия (матрица) 2 копии
- 8. Основные причины выхода на «плато» истощение субстратов (дНТФ и праймеров) падение активности реактантов (дНТФ и фермента)
- 9. Основные модификации PCR Стандартная ПЦР Гнездовая ПЦР (nested PCR) Множественная ПЦР (multiplex PCR) Количественная ПЦР в
- 10. ПЦР с «горячим стартом»
- 11. Аллель-специфическая ПЦР (SSP-PCR)
- 12. Метод анализа полиморфизма длин рестрикционных фрагментов продуктов ПЦР (ПЦР-ПДРФ) на примере эндонуклеазы рестрикции EcoR I
- 13. Tetra amplification refractory mutation system polymerase chain reaction (tetra-ARMS PCR)
- 14. ПЦР в реальном времени (Real-time PCR ) - это семейство методик количественной ПЦР со следующими чертами:
- 15. Digital PCR Позволяет определять абсолютное количество копий ДНК-мишени в образце. Обладает высокой чувствительностью и специфичностью. Проводится
- 16. Digital PCR (2) Решаемые задачи: Количественная оценка биомаркеров рака. Мутации, ассоциированные с онкологией, часто не удается
- 17. Принцип метилчувствительной ПЦР
- 18. Люди могут иметь альтернативные основания в определенном положении ДНК: это однонуклеотидный полиморфизм (Single Nucleotide Polymorphism, SNP).
- 19. Полиморфные участки Полиморфизмы являются нейтральными мутациями Большинство полиморфизмов биаллельны, но встречаются исключения Среди полиморфизмов, кроме замен,
- 20. Влияние полиморфизмов в зависимости от положения в гене
- 21. Задача исследования Выявление факторов генетической предрасположенности к заболеванию
- 22. Этапы работы Выбор полиморфных участков генов (PubMed) Выбор метода исследования (PubMed) Подбор праймеров и рестриктаз (Vector
- 23. База данных OMIM
- 24. Cloning- информация о структуре и клонировании мРНК, о структуре белкового продукта гена Gene functions- функции белкового
- 25. База данных SNP
- 26. База данных SNP
- 27. База данных SNP
- 28. База данных SNP Для того, чтобы найти необходимый полиморфизм нужно знать его код База данных SNP
- 29. База данных Gene Bank
- 30. Требования к праймерам Оптимальная длина праймеров составляет 18-з0 н. GC –состав праймеров должен находиться в пределах
- 31. Компьютерные программы для подбора праймеров
- 32. Vector NTI Создание, описание и анализ ДНК и белковых последовательностей Представление и хранение результатов поиска в
- 33. BLAST (Basic Local Alignment Search Tool) Сравнение результатов секвенирования Идентификация видов Определение локализации доменов белков Определение
- 34. BLAST
- 35. BLAST
- 36. BLAST
- 37. BLAST
- 38. BLAST
- 39. Primo
- 40. Подбор программы амплификации Определяется для каждой конкретной пары (или большего числа) праймеров Расчет Тм с помощью
- 41. Критические компоненты смеси Некритические компоненты смеси : DMSO, глицерин, моноклональные антитела, пирофосфотаза и пр.
- 42. Состав обычной ПЦР смеси
- 43. Диметилсульфоксид (DMSO) Биполярный апротонный растворитель Ингибирует спаривание комплементарных молекул ДНК
- 44. Моноклональные тела Действуют на активный центр полимеразы Ингибируют неспецифическую активность полимеразы
- 45. Пирофосфатаза Катализирует превращение пирофосфата, побочного продукта ПЦР, до ортофосфата Повышает выход ПЦР
- 46. Тетраметиламмоний хлорид (TMAC) Стабилизирует АТ пары Повышает выход и специфичность ПЦР
- 47. Почему ПЦР может «не пройти»? Плохой дизайн праймеров Неверная концентрация праймеров Слишком много dNTP или деградированные
- 48. Контаминация При проведении каждого эксперимента необходимо параллельно использовать «отрицательный контроль» (в пробирку не добавляется ДНК матрицы)
- 49. СПАСИБО ЗА ВНИМАНИЕ!
- 50. Дополнительные слайды
- 51. Методы амплификации ДНК, не требующие термоциклирования петлевая изотермическая амплификация (Loop-mediated isothermal amplification, LAMP) амплификация по типу
- 53. Скачать презентацию